Am 1. Juni fand die Auslosung der ersten Hauptrunde des DFB-Pokals für die Saison 2024/2025 im Deutschen Fußballmuseum in Dortmund statt. Von den insgesamt 64 Teilnehmern stammen viele aus den Amateurteams der Regional- und Oberliga. Der Finaltag der Amateure am 25. Mai ergänzte die Liste auf 63 Teilnehmer, wobei die Sportfreunde Lotte durch die Meisterschaft in der Oberliga Westfalen den letzten Startplatz sicherten.
Die 36 Profiteams der Bundesliga und 2. Bundesliga sowie die Meister und Spitzenplatzierungen der 3. Liga sind automatisch im DFB-Pokal der folgenden Saison vertreten. Zusätzlich haben alle Amateurvereine in Deutschland jedes Jahr die Möglichkeit, sich für die erste Runde des DFB-Pokals zu qualifizieren. Durch Wettbewerbe in den 21 Landesverbänden des DFB haben sogar Kreisligisten theoretisch die Chance, bis in die erste Hauptrunde vorzudringen.
Besonders in den Landesverbänden Bayern, Westfalen und Niedersachsen bekommen zwei Vereine die Gelegenheit, am DFB-Pokal teilzunehmen. In Niedersachsen werden zwei separate Pokalwettbewerbe ausgetragen, während Bayern und Westfalen ihre stärksten Amateurteams zur Teilnahme entsenden. Darüber hinaus qualifizierten sich weitere Teams aus verschiedenen Regional- und Oberligen für den DFB-Pokal 2024/2025 gemäß den jeweiligen Landespokal-Endspielen.